技術文章
TECHNICAL ARTICLESX射線晶體衍射儀經歷了快速發(fā)展的10年,我們的光源越來越強,探測器越來越快,數(shù)據處理越來越智能。儀器的進步,大大提高了我們的晶體數(shù)據收集的效率和成功率,讓我們有更多的時間研究更深入的問題。然而好的晶體永遠都是一位的尤其對于蛋白質晶體來說,獲得能夠衍射的晶體,仍然是主要的瓶頸之一。通常,為了檢驗蛋白質晶體的衍射質量,我們需要從晶體板上挑出晶體,加上防凍劑,冷凍,放到衍射儀上,然后測試。然而所有這些步驟都有可能損壞晶體。低溫晶體篩選不僅耗時耗力,而且我們沒有辦法避免這些操作過程對晶體衍射質量的影響。
幾年前,在同步輻射出現(xiàn)了原位晶體學的方法:快速,方便,可以直接在晶體生長環(huán)境下研究晶體的衍射。原位的方法避免了低溫晶體學在晶體轉移過程中對晶體的損害。同樣在室內衍射儀上,Bruker D8 VENTURE-ISX STAGE同樣完美地實現(xiàn)了原位晶體篩選評估:
1.切換方便,5分鐘內即可完成樣品臺的安裝和拆卸
2.軟件控制,只需要鼠標點擊即可快速對整個晶體板的每個結晶空進行查看
3.自動多樣品隊列衍射實驗
4.快速表征晶胞參數(shù),識別晶體以及后續(xù)的數(shù)據收集
▲ ISX Stage mounted on D8 VENTURE
實驗案例:GlucoseIsomerases晶體篩選和測試
儀器配置:D8VENTURE IµS 3.0,PHOTONII,ISX STAGE
樣品:GlucoseIsomerases結晶初篩48孔板,96個drop
總時間:1h(查看96個drop:30min;衍射28個晶體:30min;晶胞表征:10min)
1
晶體查看,挑選
▲ ISX Stage Software Control
2
確定晶體篩選隊列
▲ 挑選用于自動篩選的晶體
3
自動隊列晶體衍射實驗
▲ 30min,6個孔,28個晶體樣品篩選結果
4
數(shù)據收集
室溫下,原位對4顆晶體進行數(shù)據收集,然后合并數(shù)據,使用MR解析結構。
▲ 原位常溫數(shù)據采集和結構解析
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